股骨头坏死介绍

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TUhjnbcbe - 2024/7/7 17:17:00

细胞治疗,将改变人类疾病的治疗方式,由过去重复的症状控制转为一次性的治愈,是引领生物医学的希望。然而,面对数以千万级的细胞,如何快速完成筛选,是摆在很多科研人员和医疗机构面前的一道难题。

一、细胞治疗的定义

细胞治疗是利用患者自体(或异体)的成体细胞(或干细胞)对组织、器官进行修复的治疗方法。广泛用于骨髓移植、晚期肝硬化、股骨头坏死、恶性肿瘤、心肌梗死等疾病。

图1:细胞治疗图解

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二、细胞治疗分类

细胞治疗是当今的热门领域,它包括干细胞治疗(以间充质干细胞为主)、免疫细胞治疗等。

干细胞是给人体补充外源性细胞或激活内源性干细胞形成新的细胞,相当于人体的维修工。免疫细胞则是清除人体内的有害物质,包括变异的肿瘤细胞和外来的微生物入侵(病毒、细菌),相当于人体的清洁工。

1、干细胞治疗

细胞是构成人体的基本单位,各个器官的细胞死亡后,若无新生细胞补充,人就会死亡,新生细胞由存在于各个器官内的干细胞增殖分化而来。

所谓干细胞,是一种未充分分化、尚不成熟的细胞,具有再生为各种组织器官和人体细胞的潜在功能。

用于临床治疗的干细胞种类主要有骨髓干细胞、造血干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞、胰岛干细胞、脂肪干细胞等。

图2:干细胞分化的种类

(图片来源于网络,若有侵权联系删除)

干细胞治疗种类以造血干细胞为主,间充质干细胞日益增长,神经干细胞和多能干细胞的临床试验也相对较多。

2、免疫细胞治疗

细胞免疫治疗是将人体自身免疫细胞,经过体外培养、改造,再回输入人体来实施打击癌细胞的疗法。免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞,包括NK细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞等。

我们都知道,人体的免疫细胞分为多种,以肿瘤免疫疗法为例,肿瘤免疫治疗策略主要包括四大类:过继性免疫细胞治疗、免疫检验点单克隆抗体治疗、肿瘤疫苗治疗、非特异性免疫刺激治疗(细胞因子治疗)。

图3:肿瘤免疫治疗分类

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其中,过继性免疫细胞治疗(AdoptiveCellTransferTherapy,ACT),是指从肿瘤患者体内分离免疫活性细胞,在体外进行扩增和功能鉴定,然后向患者回输,从而达到直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞的目的。过继性免疫细胞治疗主要包括NK、LAK、DC、CIK、CTL、TIL、CAR-T、TCR-T等几大类,其中最典型目前相对成熟的就是CAR-T疗法。

CAR-T中文全称嵌合抗原受体T细胞(英语:ChimericantigenreceptorTcell),CAR-T疗法就是对T细胞进行改造,让T细胞更好去结合那些平时很难以发现和清除的病变细胞,实现对病变细胞的定向、精准、快速打击。

图4:CAR-T治疗大致流程

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三、细胞治疗质控

我国年颁布了《人体细胞治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》,要求体细胞治疗产品的质量控制要点从安全性和有效性出发,质量控制检测项目包括细菌、真菌、内霉素及异常毒性试验是每个制品都要检测的项目,而对不同的体细胞制品有不同的检测项目。

细胞表型特征是作为细胞学鉴定的依据;

生物学活性测定反应了体细胞制品的功能及临床应用适应症,例如体细胞具有的某种生物学功能,分泌某种产物的能力,表达某种标志的水平等;

一定的细胞浓度、纯度和活细胞比率直接关系到临床应用的效果;

一些残留物质和牛血清的残留量等将直接与不良反应有关,应加以控制;

外源因子如病毒的污染要排除;

一些来源于肿瘤的制品还必须考虑到致瘤性的测定,包括体内及体外致瘤性的测定。

图5:以骨髓间充质干细胞MSCs为例的细胞治疗质控

(图片来源于网络,若有侵权联系删除)

如果是异体细胞,除上述控制项目外还应该包括其它种属可引起的人兽共患病的控制,可能引起的免疫反应等都是重要的质量控制要考虑的问题。

四、细胞治疗技术难点

1、体细胞治疗质控难点

在体细胞采集及分离过程中的适当阶段,应对体细胞进行质控检定,包括采集与分离体细胞的收率、存活率、纯度、均一性等。

另外,回输前应进行体细胞得率及存活率检定。在纯度检测上,采用非还原十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,简称SDS-PAGE)与高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC)两种方法测定,其纯度均要达到95%以上,才能用于临床。

2、干细胞治疗质控难点

干细胞的产业化发展由上游的干细胞库、中游的干细胞增殖和研究以及下游的干细胞治疗三部分组成,形成一条很大的产业链。

从产业技术角度来看,干细胞中游研发是下游临床应用成功的关键,而干细胞原始数量都很有限,要达到临床应用的细胞数量级,就必须经过体外的扩增培养。因此,干细胞体外扩增培养技术是临床应用技术的关键。

数据显示,一次成功的治疗大约需要10个细胞,这就要求分离出来的干细胞必须在短时间内经过有效的体外扩增获得大量高质量的干细胞,从而达到细胞治疗效果。

图6:细胞治疗的基本过程示意

来源:chaum.net,中康产业资本研究中心

五、凡知医疗细胞RNA提取试剂盒

1、高通量筛选用RNA提取产品介绍:

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2、细胞RNA提取试剂盒产品特性:

适配高通量自动化核酸提取仪,最少人工操作时间;

样本制备时间短,样品前处理需10min,全自动核酸提取仪50min;

样本间差异低,结果重复性强;

纯度高,无DNA污染;

可处理细胞数量级范围5x~

3、细胞RNA提取-96孔板数据展示

4、凝胶电泳结果

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