细胞培养中的马血清
说起细胞培养用的血清,大多数人都会想到胎牛血清、新生牛血清,对于马血清却知之甚少。今天就给大家介绍一下血清中“低调的高手”——马血清。
一、马血清作用
细胞培养级的马血清,经过多次过滤,去除了许多大分子蛋白,但保留了血清中促细胞生长的活性因子,表现出与胎牛血清和牛血清的类似的特性,因而能用于细胞培养。
马血清可以刺激成纤维细胞分化,以及细胞外基质(ECM)、细胞因子的合成。另外培养神经细胞和心肌细胞、诱导生成树突状细胞等实验均可用马血清替代胎牛血清。
因此,马血清通常适用于那些研究有丝分裂后,细胞关于生长因子和激素等问题的实验。或许,我们可以这样说,从现有研究来看,马血清更适合用来研究特定种类细胞的分化。
实际实验应用方面:马血清已被用作脑皮质神经元-胶质细胞培养的一种必添加物;大鼠的PC12细胞,在培养过程中,也需要在基础培养基中添加马血清作为补充剂。
1.马血清可用于细胞培养和干细胞的诱导分化,例如:
(1)RPMI-培养液加马血清培养脐带血单个核细胞。
(参考文献:李春莉,王建伟,姜蓉,etal.人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导[J].中国组织工程研究,(23):-.)
(2)原代培养神经细胞。有人用含10%马血清的DMEM,分离培养BALB/c小鼠原代脑神经细胞。发现和添加2%神经细胞生长剂B27的Neurobasal培养基相比,含10%马血清的DMEM培养基更节省成本,方便廉价。
(参考文献:李丹,吕耀中,王微,等.两种培养基分离培养BALB/c小鼠原代神经细胞方法的比较[C]//中国北方实验动物科技年会.辽宁省实验动物学会,.)
(3)诱导脂肪干细胞向成肌细胞分化
(文献来源:刘杰,傅强.马血清在脂肪干细胞成肌诱导中的作用[J].中国组织工程研究,15(14))
(4)培养骨髓基质细胞。与胎牛血清相比,马血清对小鼠骨髓基质细胞的促增殖作用更好。
(文献来源:王改琴.当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达及其黏附功能的影响[D].学位论文.重庆医科大学,.)
(5)添加20%马血清的L-DMEM培养液可诱导人骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。
(文献来源:赵文静,陈亚洁,刘薇.人骨髓间充质干细胞分离培养及生物学特性研究.中国现代医学杂志..16(18):-)
2.马血清添加到微生物培养基中,可用于培养微生物,如:
(1)马血清添加到培养基中用于支原体的培养。在《兽药典》中,含马血清的支原体培养基被用于兽用疫苗的支原体检查。用KM2培养基(含马血清)还可培养猪肺炎支原体。
(文献来源:胡茂志焦新安,等.猪肺炎霉形体单克隆抗体的制备与鉴定.《中国兽医科技》年12期)
(2)马血清加入到固体和液体培养基中,可用于培养幽门螺杆菌。并且,和羊血清和牛血清比较,添加马血清的培养基更易于分装和保存。
(文献来源:刘琳娜,丁士刚,张静,等.几种培养幽门螺杆菌方法的比较[J].胃肠病学,,():-.)
3.马血清及激素可共同诱导建立家兔股骨头缺血坏死的模型。
(文献来源:洪嵩,张天宏.非创伤性股骨头坏死模型的血液流变学及脂质代谢[C]//第一届贵州骨科论坛.)
二、注意事项
与胎牛血清一样,马血清在使用过程中也应注意几个原则:
1、避免反复冻融;
2、三步法解冻,及时分装;
3、配制好的完全培养基在4℃储存不要超过7天。
还有一个大家比较关心的问题,马血清是否需要灭活?
我们都知道,胎牛血清由于特殊的采血时间(5-8月胎龄),牛胚胎体内还没有形成完整的补体系统,因而不需要采用热灭活的手段对补体进行灭活。
而马血清,在没有特殊说明的情况下,一般采自成年马匹。作为脊椎动物,成年马也拥有完整的补体系统。
因而,如果所进行的实验中,涉及补体相关内容,建议大家在使用前对马血清进行热灭活,也可以直接购买商品化的灭活马血清。一些比较成功的实验案例中,所用到的马血清,也是经过热灭活的。
相关实验请参考: